Práca s bunkovými kultúrami – 1
Práca s bunkovými kultúrami – 1
Práca s bunkovými kultúramiPráca s bunkovými kultúrami – 2
Práca s bunkovými kultúrami – 2
Práca s bunkovými kultúramiPráca s bunkovými kultúrami – 3
Práca s bunkovými kultúrami – 3
Práca s bunkovými kultúramiPráca s bunkovými kultúrami – 4
Práca s bunkovými kultúrami – 4
Práca s bunkovými kultúramiPráca s bunkovými kultúrami – 5
Práca s bunkovými kultúrami – 5
Práca s bunkovými kultúramiPráca s bunkovými kultúrami – 6
Práca s bunkovými kultúrami – 6
Práca s bunkovými kultúramiPráca s bunkovými kultúrami – 7
Práca s bunkovými kultúrami – 7
Práca s bunkovými kultúramiPráca s bunkovými kultúrami – 8
Práca s bunkovými kultúrami – 8
Práca s bunkovými kultúramiPráca s bunkovými kultúrami – 9
Práca s bunkovými kultúrami – 9
Práca s bunkovými kultúramiPráca s bunkovými kultúrami – 10
Práca s bunkovými kultúrami – 10
Práca s bunkovými kultúramiPráca s bunkovými kultúrami – 11
Práca s bunkovými kultúrami – 11
Práca s bunkovými kultúramiPráca s bunkovými kultúrami – 12
Práca s bunkovými kultúrami – 12
Práca s bunkovými kultúramiPráca s bunkovými kultúrami – 13
Práca s bunkovými kultúrami – 13
Práca s bunkovými kultúramiPráca s bunkovými kultúrami – 14
Práca s bunkovými kultúrami – 14
Práca s bunkovými kultúramiPráca s bunkovými kultúrami – 15
Práca s bunkovými kultúrami – 15
Práca s bunkovými kultúramiPráca s bunkovými kultúrami – 16
Práca s bunkovými kultúrami – 16
Práca s bunkovými kultúramiPráca s bunkovými kultúrami – 17
Práca s bunkovými kultúrami – 17
Práca s bunkovými kultúrami
Využitie bunkových kultúr vo virológii – 1
Využitie bunkových kultúr vo virológii – 1
Využitie bunkových kultúr vo virológiiVyužitie bunkových kultúr vo virológii – 2
Využitie bunkových kultúr vo virológii – 2
Využitie bunkových kultúr vo virológiiVyužitie bunkových kultúr vo virológii – 3
Využitie bunkových kultúr vo virológii – 3
Využitie bunkových kultúr vo virológiiVyužitie bunkových kultúr vo virológii – 4
Využitie bunkových kultúr vo virológii – 4
Využitie bunkových kultúr vo virológiiVyužitie bunkových kultúr vo virológii – 5
Využitie bunkových kultúr vo virológii – 5
Využitie bunkových kultúr vo virológiiVyužitie bunkových kultúr vo virológii – 6
Využitie bunkových kultúr vo virológii – 6
Využitie bunkových kultúr vo virológiiVyužitie bunkových kultúr vo virológii – 7
Využitie bunkových kultúr vo virológii – 7
Využitie bunkových kultúr vo virológii
Troubleshooting
Problém
Príčina
Riešenie
Bunky nerastú/rastú pomaly
Nevhodné kultivačné médium.
Používať predhriate kultivačné médium, odporúčané dodávateľom
Nízka kvalita séra v kultivačnom médiu.
Použiť sérum z inej šarže
Bunky sú pasážované príliš často.
Použiť zdravé bunky z nižšej pasáže
Bunky majú možnosť rásť aj po vytvorení kompletnej jednovrstvy
Pasážovať cicavčie bunky v log fáze rastu ešte pred dosiahnutím konfluencie
Kultúra je kontaminovaná mykoplazmami
Odstrániť bunky, médiá a roztoky a zaobstarať novú bunkovú suspenziu, čerstvé médiá a roztoky
Bunky neadherujú k povrchu
Kontaminácia mykoplazmami
Otestovať kultúru na prítomnosť mykoplaziem, ak je test pozitívny, dekontaminovať bunky, vyčistiť laminár aj termostat
Použitie priveľkého množstva trypsínu
Trypsinizovať kratšiu dobu alebo s nižšou koncentráciou trypsínu, pred pridaním nového média odsať čo najviac trypsínu
Použitie nevhodnej kultivačnej nádoby
Overiť, či plastová nádoba nie je po dobe expirácie a či sa použil plast vhodný pre adherentné bunky
Precipitát v médiu a zmena pH
Kontaminácia baktériami, kvasinkami alebo hubami
Dekontaminovať bunky
Precipitát v médiu, bez zmeny pH
Nerozpustené alebo precipitované zložky média
Opláchnuť sklenené pomôcky deionizovanou vodou a sterilizovať
Rýchla zmena pH v médiu
Nevhodná koncentrácia CO2
Zvýšiť alebo znížiť percento CO2 v termostate podľa koncentrácie bikarbonátu sodného v médiu
Príliš zatiahnutý vrchnák na kultivačnej fľaši
Povoliť vrchnák, aby sa CO2 dostal k bunkám
Nevhodný tlmivý systém
Pridať HEPES do média (finálna konc. 10-25mM)
Nesprávne množstvo solí v médiu
Zmeniť typ média, odporúčania pre jednotlivé bunkové kultúry sú na www.atcc.org
Kontaminácia baktériami, mikroskopickými hubami, kvasinkami
Dekontaminovať bunky
Do média pridávať kombináciu viacerých antibiotík
Po rozmrazení bunky nie sú životaschopné
Bunky boli nesprávne skladované
Zaobstarať novú bunkovú suspenziu a skladovať ju v tekutom dusíku
Bunky boli rozmrazené nesprávne
Pri rozmrazovaní dodržiavať inštrukcie od dodávateľa. Rozmrazovanie musí byť rýchly proces, ale rozrieďovanie bunkovej suspenzie v predhriatom médiu by malo byť pomalé
Rozmrazovacie médium nie je vhodné
Použiť médium odporúčané dodávateľom a uistiť sa, že médium je predhriate
Bunky sú príliš rozriedené
Pre lepšie zotavenie zakladať rozmrazené bunky nahusto
Neopatrná práca s bunkami/mechanický stres
Bunkovú suspenziu nevortexovať a necetrifugovať pri vysokých otáčkach
Glycerol použitý v zmrazovacom médium bol skladovaný na svetle
Zaobstarať novú bunkovú suspenziu. (Glycerol sa na svetle mení na akroleín, ktorý je pre bunky toxický)