Elektroforéza v agarózovom géli – 1
Elektroforéza v agarózovom géli – 1
ELFO v agarózovom géliElektroforéza v agarózovom géli – 2
Elektroforéza v agarózovom géli – 2
ELFO v agarózovom géliElektroforéza v agarózovom géli – 3
Elektroforéza v agarózovom géli – 3
ELFO v agarózovom géliElektroforéza v agarózovom géli – 4
Elektroforéza v agarózovom géli – 4
ELFO v agarózovom géliElektroforéza v agarózovom géli – 5
Elektroforéza v agarózovom géli – 5
ELFO v agarózovom géliElektroforéza v agarózovom géli – 6
Elektroforéza v agarózovom géli – 6
ELFO v agarózovom géliElektroforéza v agarózovom géli – 7
Elektroforéza v agarózovom géli – 7
ELFO v agarózovom géliElektroforéza v agarózovom géli – 8
Elektroforéza v agarózovom géli – 8
ELFO v agarózovom géliElektroforéza v agarózovom géli – 9
Elektroforéza v agarózovom géli – 9
ELFO v agarózovom géliElektroforéza v agarózovom géli – 10
Elektroforéza v agarózovom géli – 10
ELFO v agarózovom géliElektroforéza v agarózovom géli – 11
Elektroforéza v agarózovom géli – 11
ELFO v agarózovom géli
Využitie ELFO v agarózovom géli vo virológii – 1
Využitie ELFO v agarózovom géli vo virológii – 1
Využitie ELFO v agarózovom géli vo virológiiVyužitie ELFO v agarózovom géli vo virológii – 2
Využitie ELFO v agarózovom géli vo virológii – 2
Využitie ELFO v agarózovom géli vo virológiiVyužitie ELFO v agarózovom géli vo virológii – 3
Využitie ELFO v agarózovom géli vo virológii – 3
Využitie ELFO v agarózovom géli vo virológiiVyužitie ELFO v agarózovom géli vo virológii – 4
Využitie ELFO v agarózovom géli vo virológii – 4
Využitie ELFO v agarózovom géli vo virológiiVyužitie ELFO v agarózovom géli vo virológii – 5
Využitie ELFO v agarózovom géli vo virológii – 5
Využitie ELFO v agarózovom géli vo virológii
Troubleshooting
Problém
Príčina
Riešenie
Rozmazané DNA prúžky („bandy“) v géli
DNA bola degradovaná
Vyhnúť sa kontaminácii nukleázami. Používať Dnase-free plast aj roztoky
Na gél bolo nanesenej príliš veľa DNA
Znížiť množstvo DNA nanášanej na gél
DNA obsahuje príliš veľa solí
Odstrániť prebytočnú soľ vyzrážaním s etanolom pred elektroforézou
DNA bola kontaminovaná proteínmi
Odstráňte proteíny fenolovou extrakciou pred elektroforézou
DNA produkt bol krátky
Zvoľte vhodnú koncentráciu agarózy -malé fragmenty DNA sa lepšie oddeľujú na viac-percentnej agaróze (cca 2 %)
Anomálne migrácie DNA „bandov“
Boli použité nesprávne podmienky
Nezvyšujte napätie nad 20 V/cm. Udržiavajte teplotu počas elektroforézy menšiu ako 30°C, skontrolujte pufor, či má správne pH
Zakrivené „bandy“
Nerovnomerná teplota gélu
Gél by sa nemal zahrievať, ochlaďte gél studeným
Nerovnaká koncentrácia medzi pufrom gélu a pufrom v elektroforetickej aparatúre
Pri príprave gélu treba použiť rovnaký pufor aký sa naleje do elektroforetickej aparatúry
Privysoké napätie
Znížiť napätie, ideálne na 5 V/cm agarózového gélu
Slabé alebo žiadne DNA „bandy“
Na gél sa vnieslo nedostatočné množstvo DNA
Zvýšte množstvo DNA
DNA bola degradovaná
Vyhnite sa kontaminácii nukleázami
DNA sa dostala počas elektroforézy preč z gélu
Skráťte čas elektroforézy a znížte napätie alebo použite viacpercentný gél
Pri DNA farbených s EtBr bol použitý nesprávny zdroj UV žiarenia.
Skontrolujte nastavenia zdroju UV žiarenia a zobrazovacieho aparátu
Chýbajúce DNA „bandy“
DNA „bandy“ podobnej molekulovej veľkosti neboli oddelené
Zvýšte čas elektroforézy (pri nižšom napätí) a skontrolujte % gélu pre správne rozdelenie.
DNA bola denaturovaná
Nezohrievajte štandardy pred elektroforézou
Roztok TAE má nesprávne pH
Skontrolujte pH roztoku a v prípade, že je kyslé namiesto zásaditého, pripravte čerstvý roztok so správnym pH